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層析硅膠制備板爬大板的技巧總結(jié)可以分的樣品:1.要對(duì)弱酸比較穩(wěn)定,因?yàn)楣枘z板是弱酸性的,雖然可以堿化;對(duì)空氣,水,有機(jī)溶劑穩(wěn)定;2. 在常規(guī)的,低沸點(diǎn)的溶劑里要好溶,溶不掉的另想辦法。3.最好有紫外,紫外不顯色的,因?yàn)樵谥苽浒迳夏阌闷渌椒@色一般都會(huì)破壞樣品,所以沒(méi)紫外的最好換方法。 大板的容量。一般一塊板上樣量在100 mg以下(粗產(chǎn)品),當(dāng)然如果不好分,上樣量要小一些,但最好不要少于15mg,否則難回收。東西多可以多上幾塊板,1g以上的還是過(guò)柱子吧。前邊那位說(shuō)進(jìn)口板只分8mg,太少了點(diǎn),分出來(lái)的東西大概只能夠打個(gè)核磁。 其次上樣:用盡可能少的溶劑溶解你的樣品。不好溶解的樣品,尤其是在展開(kāi)劑里不好溶的樣品會(huì)趴在上樣線那里爬不上去。必要時(shí)可以加DMF,DMSO助溶,但上樣后最好先用石油醚等小極性的溶劑先爬一遍,否則DMF,DMSO會(huì)把你的樣帶上去花掉。我們上樣是用塑料滴管前邊剪掉一點(diǎn),揪一點(diǎn)脫脂棉捻個(gè)細(xì)條塞緊滴管里,然后就可以吸取樣品溶液。上樣前先在板上離板子邊緣1.5厘米左右的地方用鉛筆畫(huà)條線,上樣時(shí)就沿著這條線均勻的把樣品溶液涂上去,勁量直一些窄一些。溶劑較多一次上不完的,把先上好的溶液吹干再接著上第二批,如此上完后,用滴管吸點(diǎn)干凈溶劑再上一下,把棉花上粘的樣都上到板上去。樣品上好后,要把溶劑盡量吹干。用電吹風(fēng)吹的時(shí)候要小心別正對(duì)著使勁用高熱風(fēng)吹,小心把樣吹壞了。 展開(kāi)劑的選擇:常用的2種體系:乙酸乙酯/石油醚,甲醇/二氯甲烷,后者一般用于極性大的。展開(kāi)劑的極性就是你爬小板把要的點(diǎn)爬到rf 02,0.3左右的極性。有時(shí)候可以用三組分的展開(kāi)劑,如乙酸乙酯/石油醚/二氯甲烷或乙酸乙酯/甲醇/二氯甲烷之類,但不要加THF,DSMO,DMF之類大極性高沸點(diǎn)的溶劑。難分的樣,展開(kāi)劑的極性要小,一遍爬不開(kāi),可以多爬幾遍。一般一個(gè)展缸配一百毫升展開(kāi)劑,可以同時(shí)爬3塊板,爬一次大概一個(gè)小時(shí),甲醇/二氯甲烷體系會(huì)快一些。酸性的化合物,展開(kāi)劑里可以滴一兩滴乙酸,堿性的化合物,可以滴一點(diǎn)三乙胺或氨水。 板爬好了就在紫外燈下找到你要的那條帶,用鉛筆畫(huà)出來(lái)。要是不確定是哪條帶,可以把疑似帶刮下一小點(diǎn)放樣品管里,用甲醇乙腈之類的溶一下,濾膜過(guò)濾,濾液去打個(gè)LCMS。確定要的帶,用小刀或刮刀把整條帶上的硅膠都刮下來(lái)刮到大稱量紙上,記得一定要戴口罩!把刮下來(lái)的硅膠用稱量紙包起來(lái)碾碎(我一般就用小展缸的底)。把硅膠倒在三角瓶里,扔個(gè)磁子進(jìn)去,加進(jìn)去樣品的良溶劑(我們一般用1:10 的甲醇/二氯甲烷),放攪拌器上攪個(gè)半小時(shí),過(guò)濾,濾液旋干就OK了。注意:用甲醇乙腈等極性強(qiáng)的溶劑會(huì)把硅膠也溶出來(lái),你旋干了稱重有可能比你分之前的量還多,核磁上會(huì)有點(diǎn)不干凈,LCMS上紫外沒(méi)吸收,但也可能會(huì)在進(jìn)樣峰那里有個(gè)包不好看。
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