有機新手如何裝好柱子

柱層析是世界各地實驗室中最常用的純化技術(shù)。如果做得好，它可以簡單快速地從混合物中分離出所需的化合物。但是，與許多化學(xué)實踐一樣，快速有效地設(shè)置和運行色譜柱可能需要數(shù)年才能掌握。在這里，小編將提供了一些柱層析的小tips和技巧，對柱層析過程中常遇到的一些問題進行故障排除并給出替代方案。

裝柱：

裝柱子（添硅膠）時，常用的有兩種方法：即濕法裝柱和干法裝柱，二者各有優(yōu)劣。不論干法還是濕法，硅膠（稱為固定相更為廣義）的上表面一定要平整，并且硅膠（固定相）的高度一般為15cm左右（長度沒有絕對之說，根據(jù)自身情況而定，制備的大柱可以長達(dá)一米），太短了可能分離效果不好，太長了也會由于擴散或拖尾導(dǎo)致分離效果不好。

濕法裝柱是先把硅膠用適當(dāng)?shù)娜軇┌鑴蚝�，再填入柱子中，然后再加壓（土方法可以用養(yǎng)魚的氧氣泵加壓或是用氮氣，當(dāng)然不加壓也可以）用淋洗劑"走柱子"，本法最大的優(yōu)點是一般柱子裝的比較結(jié)實，沒有氣泡。

干法裝柱則是直接往柱子里填入硅膠，然后再輕輕敲打柱子兩側(cè)（濕法也要敲的，效果好點），至硅膠界面不再下降為止，然后再填入硅膠至合適高度，最后再用油泵直接抽，這樣就會使得柱子裝的很結(jié)實（一般柱子不敢用油泵抽，怕把柱子抽裂了）。接著是用淋洗劑"走柱子"，一般淋洗劑是采用TLC分析得到的展開劑的比例再稀釋一倍后的溶劑。通常上面加壓，下面再用油泵抽，這樣可以加快速度。干法裝柱較方便，但最大的缺陷在于"走柱子"時，由于溶劑和硅膠之間的吸附放熱（可以用手摸柱子明顯感覺到）（梯度洗脫時，濕法裝柱也會出現(xiàn)該情況，比較不好處理，可以緩慢改變?nèi)軇�，且置于通風(fēng)處），容易產(chǎn)生氣泡，這一點在使用低沸點的淋洗劑時如乙醚（用乙醚最最明顯），二氯甲烷更為明顯。雖然產(chǎn)生的氣泡在加壓的情況下不易察覺，但是，一旦撤去壓力，如在上樣、加溶劑等操作的時候，氣泡就會釋放出來，嚴(yán)重時，整個柱子變花，樣品不可能平整地通過，當(dāng)然也就談不上分離了。解決的辦法是：

第一、硅膠一定要壓結(jié)實；

第二、一定要用較多的溶劑"走柱子"，一定要到柱子的下端不再發(fā)燙，恢復(fù)到室溫后再撤去壓力。

也有介紹在硅膠的最上層填上一小層石英砂(我一般墊張濾紙，撒上石英砂，再放些棉花)，防止添加溶劑的時候，使得樣品層不再整齊。但我的感覺是如果小心上樣，添加溶劑，則沒有這個必要。

濕法上樣

1. 將樣品溶解在最少量的溶劑中（5-10滴）。此處允許使用比洗脫溶劑稍微更極性的溶劑。如果您需要使用二氯甲烷或更強的溶劑，可能優(yōu)選下述干法上樣方法。

2. 使用注射器或吸管將樣品直接滴到硅膠的頂部。盡量不要擾動硅膠表面，理想情況下，樣品應(yīng)在表面上均勻分布，以便形成薄的水平帶。

3. 添加完整個樣品后，讓色譜柱排出，使溶劑水平接觸二氧化硅頂部。

4. 小心地添加一層沙子（約2-5毫米）。這將有助于防止二氧化硅表面因添加更多溶劑而受到干擾。

5. 使用移液器小心添加更多溶劑，使溶劑水平高于沙子頂部約10 mm。

6. 讓這種溶劑排出，直至溶劑水平高于砂子頂部約1-2毫米。

7. 重復(fù)步驟5和6一次或兩次。這將確保您的樣品被吸收到二氧化硅上。

8. 最后，根據(jù)需要添加盡可能多的溶劑，然后就可以開始運行列了。